《European Journal of Biochemistry》上曾發表了一篇題為“Preferential pre-mRNA utilisation of an upstream cryptic 5' splice site created by a single base deletion mutation in exon 37 of the FBN-1 gene”的文章，該文章在一名馬凡綜合征患者及其之前未確診的父親身上，發現原纖維蛋白-1基因37號外顯子的一個堿基（A4704）雜合缺失。雖然是移碼突變，但是功能學顯示未發生無義介導的mRNA降解（NMD），而是產生了隱匿剪接位點，出現了異常轉錄本，發生了顯性負相效應，而非單倍劑量不足。 摘要 在一名馬凡綜合征患者及其之前未確診的父親身上，發現原纖維蛋白-1基因37號外顯子的一個堿基（A4704）雜合缺失。在培養的先證者皮膚成纖維細胞的前體mRNA加工過程中，該缺失在37號外顯子中產生了一個隱匿的5'剪接位點，該剪接位點優先于正常的5'剪接位點。突變體mRNA顯示從37號外顯子的3'端缺失了48 bp，預測將恢復突變體mRNA中的閱讀框，并導致從原纖維蛋白-1分子的中央八半胱氨酸重復基序中缺失了16個氨基酸序列。有趣的是，37號外顯子中隱匿的5'剪接位點和正常的5'剪接位點在剪接位點選擇上基本一致。結合當前有關前體mRNA剪接機制的理論，討論了優先利用隱匿位點的問題。反轉錄PCR分析表明，在患者皮膚成纖維細胞中，錯誤剪接的突變mRNA的穩態水平與正常等位基因的水平接近。此外，來自免疫印跡和脈沖追蹤生物合成標記的證據表明，細胞合成和分泌接近正常數量的原纖維蛋白-1。然而，與未受累個體培養的對照細胞相比，先證者的成纖維細胞產生的細胞外基質中通過生物合成或免疫熒光檢測到少量的原纖維蛋白-1。因此，在這種培養體系中，稍短的突變體原纖維蛋白-1分子似乎對正常纖維蛋白-1分子并入微纖維產生了強大的顯性負相效應。這種在細胞培養中對微纖維合成的嚴重抑制與先證者的‘典型’表型形成對比，表明影響微纖維形成的因素在體內和體外環境中可能存在很大差異。 結果 圖1. 單堿基缺失在37號外顯子中產生隱匿的剪接位點 注：（a）行顯示了通過先證者基因組DNA的一個等位基因中A核苷酸（A4707）缺失，而產生的優先利用的隱匿剪接位點的位置。隱匿的和正常的剪接序列被畫線標出。（b）行顯示了cDNA序列48個堿基的缺失（小寫字母部分），編號4700-4747。（c）行顯示了該區域的正常原纖維蛋白-1氨基酸序列。（d）行顯示了預測的因隱匿剪接而導致的原纖維蛋白-1中16個氨基酸（編號1567-1572）的缺失。注意，閱讀框保持不變。（e）行顯示了如果將正常的5'剪接位點用于突變的前體mRNA，則預測原纖維蛋白-1被截短。 圖2. 皮膚成纖維細胞培養的免疫熒光染色 注：將來自對照個體（A和C）和先證者（B和D）的細胞培養至融合后7天，然后用抗原纖維蛋白-1單克隆抗體201（A和B）和A5（C和D）染色。放大倍數：A和B，×95；C和D，×160。Bars = 100 μm。 討論 與其他馬凡綜合征病例一樣，家族性FBN1基因突變與可變表型之間的相關性尚不清楚。每個個體的表型很可能受到與突變的前體mRNA、mRNA和原纖維蛋白-1分子的合成和加工有關的其他基因產物的組織變異的影響。先證者的皮膚成纖維細胞在培養過程中幾乎完全抑制了微纖維的合成，這與先證者不太嚴重的‘典型’表型形成對比，表明影響微纖維形成的因素在體內和體外環境中可能存在很大差異。有趣的是，如果突變的37號外顯子在正常位置被剪接，則由于存在過早終止密碼子，mRNA可能會迅速降解。此外，如果真的發生了翻譯，那么最終截短的原纖維蛋白-1分子很可能會在細胞內降解。這將導致功能等同于一個null等位基因和一個相對輕微的表型。有一種有趣的可能性：在馬凡綜合征的例子（如本文所述）中，個體不同組織中突變FBN1基因剪接模式的變化可能對表型的嚴重性產生重要影響。 參考文獻 Gibson MA, Ellis SL, Ades LC, et al. Preferential pre-mRNA utilisation of an upstream cryptic 5' splice site created by a single base deletion mutation in exon 37 of the FBN-1 gene. Eur J Biochem, 1998 Aug 15; 256(1): 221-8. 關于馬凡綜合征及相關內容的更多介紹，如下： 《最新研究——基于馬凡綜合征的多組學研究，進一步了解主動脈疾病的分子機制》
